Cloning and Expression of Bst DNA Polymerase I Gene in E. coli BL21
نویسندگان
چکیده مقاله:
خلاصه DNA پلیمرازها علاوه بر کاربردشان در همسانه سازی و تصحیح ، در انواع تکنیک های ملکولی مانند تکثیر DNA ، جهش های نقطه ای ، توالی یابی DNA ، انواع مختلف PCR ، LAMP و ...اهمیت دارند. پس از کشف PCR تلاش هایی مبنی بر تشخیص و جداسازی آنزیم های مقاوم به دماهای بالا که توانایی تکثیر موثر DNA در دماهای بالا انجام گرفت. در این پژوهش ، سویه Geobacillus stearothermophilus strain 10 به منظور همسانه سازی ژن رمزگذار Bst DNA Polymerase استفاده گردید. پس از استخراج DNA باکتری ، ژن مورد نظر با استفاده از پرایمر های طراحی شده و با روش PCR تکثیرگردید. همسانه سازی ژن رمزگذار آنزیم در ناقل بیانی pET32a و انتقال آن در باکتری E.coli BL21 صورت گرفت. پس از بیان ژن در میزبان با استفاده از IPTG، پروتئین حاصل با استفاده از ستون های IMAC خالص سازی گردید . برای تعیین کیفی فعالیت، آنزیم نوترکیب در واکنش LAMP به کار گرفته شد. نتایج نشان می دهد آنزیم Bst Polymerase می تواند جایگزین مناسبی برای نوع وارداتی آن باشد. کلمات کلیدی: Bst DNA polymerase ، همسانه سازی، بیان ژن، LAMP, PCR
منابع مشابه
Expression of Taq Polymerase I Gene in Escherichia coli BL21
The thermostable properties of Taq DNA polymerase from Thermus aquaticus have contributed greatly to the yield, specificity, automation, and utility of the polymerase chain reaction method for amplifying DNA. Taq polymerase is widely used enzyme for DNA amplification in PCR techniques and highly applicable in molecular biology and biotechnology. In this study the Taq gene was amplified from the...
متن کاملRT-PCR MEDIATED CLONING OF HUMAN GROWTH HORMONE GENE AND I TS EXPRESSION IN E. coli
Human growth hormone (hGH) genomic sequence containing 5 exons and 4 introns was cloned in pcDNA-3 and the constructed plasmid was subsequently used for transfection ofNlli-3T3 cell line using lipofection technique. Expression of hGH in stably transfected cells was assayed using ELISA. Total RNA was extracted from transfected cells and hGH cDNA was amplified by RT-PCR using specific primers...
متن کاملCloning and Expression of Thermus Aquaticus DNA Polymerase Gene, Using a Thermo-Inducible Expression Vector
DNA polymerase gene from Thermus aquaticus strain YT1 was amplified using VENTTM DNA po-lymerase and cloned under the control of X.PR promoter and expression was induced by a shift in tern perature. The culture was then sonicated, and after centrifugation the lysate was treated with polyethyleneimine followed by a salting-out step. Finally the protein was precipitated with ammonium sulfate and...
متن کاملCLONING AND EXPRESSION OF A HUMAN INTERFERON a2 GENE IN E. COLI
The plasmid pALCA1SIFN containing cDNA that encodes the human interferon a-2b was obtained from the ATCC(no. 531667). In this system the expression of the gene is under the control of an alcA promoter. alcA p is a specific promoter for expression of different genes in Aspergillusfilamentous. In this plasmid the coding region of IFN?-2b is preceded by the coding region of a synthetic signal ...
متن کاملCloning, Codon Optimization, and Expression of Yersinia intermedia Phytase Gene in E. coli
Background: Phytate is an anti-nutritional factor in plants, which catches the most phosphorus contents and some vital minerals. Therefore, Phytase is added mainly as an additive to the monogastric animals’ foods to hydrolyze phytate and increase absorption of phosphorus. Objectives: Y. intermedia phytase is a new phytase with special characteristics such as high specific activity, pH stabilit...
متن کاملDesign and Construction of ctxB-gfp-stxB Gene Cassette and Investigation of Its Expression in E. coli Bl21 (DE3)
Background & Objective: In order to enhance the expression of soluble proteins and facilitate their purification and development of multi-functional polypeptide , chimerical recombinant proteins have been invented . The purpose of this study was to construct ctxB-gfp-stxB gene cassette to measure the uptake and excretion of chimerical antigen in future studies. Materials & Methods: After prep...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 8 شماره 32
صفحات 41- 46
تاریخ انتشار 2019-12-22
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023